利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法及其应用与流程

技术特征：

1.利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取处于对数生长期的含有外源基因的农杆菌，重悬于培养基中，得到转化菌液；

2)取成熟的花生种子，浸泡20-30分钟，萌发0-4天；然后在离胚根0.2-0.5cm处将所述花生种子横切为两半，选择含有胚根的一半，即为转化受体；

3)将所述转化受体浸泡在转化菌液中，侵染20-50分钟，接着取出转化受体，吸干表面的液体，再置于吸水纸上，于22±2℃暗培养3-4天，得到花生幼苗；培养过程中，向吸水纸上喷施含0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤的MS培养基，使得吸水纸保持湿润；

4)将所述花生幼苗继续培养至得到花生植株，对花生植株进行鉴定，即可确定转基因植株。

2.如权利要求1所述的利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述的外源基因为双丙酰磷抗性基因。

3.如权利要求1所述的利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法，其特征在于，在步骤1)中，采用YEP液体培养基，于28℃下将含有外源基因的农杆菌培养至OD600为0.5-0.8，即得所述处于对数生长期的含有外源基因的农杆菌。

4.如权利要求1所述的利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述培养基为含100-200μM的乙酰丁香酮的MS液体培养基。

5.如权利要求1所述的利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法，其特征在于，在步骤1)中，将含有外源基因的农杆菌接种于含抗生素的YEP液体培养基中，28℃摇床过夜，再按体积百分比1％的接种量转接入50-800mL含抗生素的YEP液体培养基中，培养2-4小时至OD600为0.6，收集菌体；然后用50-800mL含100-200μM的乙酰丁香酮的MS液体培养基重新悬浮沉淀，将菌液转入50-800mL含100-200μM的乙酰丁香酮的MS液体培养基中，于28℃摇床上培养至OD600到0.6，即得转化菌液。

6.如权利要求1所述的利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法，其特征在于，在步骤2)中，取成熟的花生种子，浸泡20-30分钟，萌发0-4天；然后在离胚根0.2-0.5cm处将所述花生种子横切为两半，正好切掉胚芽，选择含有胚根的一半，即为转化受体。

7.如权利要求1所述的利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法，其特征在于，在步骤3)中，将所述转化受体浸泡在转化菌液中，使得转化菌液刚好浸没转化受体。

8.如权利要求1所述的利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法，其特征在于，在步骤3)中，所述侵染的时间为30-50min。

9.如权利要求1所述的利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法，其特征在于，在步骤4)中，花生幼苗在培养成花生植株的过程中，进行了炼苗、移栽及除草剂筛选的处理。

10.如权利要求1-9所述的利用横切花生种子快速获得转基因花生的方法在制备转基因花生中的应用。