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Exosome reagent
24个月
上海宇玫博生物科技有限公司
常温18-25℃;运输条件:常温;
5T
产品名称:外泌体提取纯化试剂盒-柱纯法(细胞上清、尿液、植物等)
产品用途:采用阴离子交换色谱法,适用于细胞上清、尿液、植物等样本中的外泌体提取纯化,试剂盒可以提取 100ml 细胞上清液;
产品介绍:
外泌体是由细胞分泌的包含 RNA 和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子;然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。 外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。
宇玫博生物自主开发的外泌体提取纯化试剂盒-柱纯法,适用于细胞培养上清液(也可用于尿液)中的外泌体提取纯化,试剂盒采用阴离子交换色谱法原理,与被分离样品中带负电荷的外泌体相结合,从而实现外泌体的分离。该试剂盒具有快速、高效、获得的外泌体纯度高等特点,可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。
组分说明:
产品优势:
外泌体提取纯化试剂盒-柱纯法适用于细胞培养上清液、尿液等非粘稠性样本中的外泌体提取纯化。
方便快捷:提取过程不需要高速离心机,上样到获得外泌体仅需 1h
稳定性高:无剪切力,保留外泌体的完整性和生物活性
纯度高:层析法纯度更高,回收率 30%,粒径均一且重复性好
质控数据:
实验方法
一、 样品预处理
1、 取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后置于 4℃解冻,融化后置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后直接置于冰上;
2、 样品处理量(单个柱子处理量):
注:每个 “Exosome Extraction Column” 处理量 10~20 mL(未经浓缩的原始上清),样品过少可能导致获得的外泌体浓度低,样品过多可能导致堵柱。
3、 离心去细胞:样品于 4℃ 以 300 ×g(~1,640 rpm**)离心 5 min,去除样品中的细胞;**为约10 cm 有效离心半径的大离心机换算(≥15 mL 离心管),下同。
4、 离心去细胞碎片:将去除细胞后的样品于 4℃ 以 3,000×g(~5,200 rpm**)离心 10 min,去除样品中的细胞碎片(注:若沉淀较多,可 3,000 ×g,10 min 离心多次至无明显沉淀,每次取离心上清液);
5、 上清液过滤:去除细胞碎片的离心上清液用 0.45 μm 或 0.22 μm 过滤器过滤至新的容器中。
二、 提取前准备
1、 固定外泌体提取柱(Exosome Extraction Column):取出提取柱,将提取柱上下筛板取下后垂直固定于试管架或铁架台上,待填料保存液自然流尽;
2、 加入 Solution A 溶液:填料保存液流尽后沿柱子内壁缓慢加入 5 mL Solution A 溶液,待 Solution A 溶液自然流尽;
3、 加入 Solution B 溶液:Solution A 流尽后沿柱子内壁缓慢加入 5 mL Solution B 溶液,待 Solution B 溶液自然流尽,等待上样。
三、 提取外泌体
1、 过柱:将经 0.45 μm 或 0.22 μm 过滤器过滤后的细胞上清液沿柱子内壁缓慢多次加入提取柱中,待细胞上清液自然流尽(注:每个“Exosome Extraction Column”上样量 10~20 mL(未经浓缩的原始上清),样品过少可能导致获得的外泌体浓度低,样品过多可能导致堵柱);
2、 平衡:细胞上清液流尽后沿柱子内壁缓慢多次加入 15mL Solution B 溶液,待 Solution B 溶液自然流尽;
3、 洗杂:Solution B溶液流尽后沿柱子内壁缓慢加入 0.8mL Solution C 溶液,待 Solution C 溶液自然流尽;
4、 洗脱:待上步骤中 Solution C 溶液流尽后沿柱子内壁再次缓慢加入 1 mL Solution C 溶液,收集该流穿液(该流穿液中富含外泌体颗粒);
5、 浓缩(选做):若外泌体浓度过低,可用 100 KD 超滤柱将流穿液适当浓缩;
6、 纯化外泌体:将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Filter(EPF 柱)上室中,于 4℃ 以 3,000×g(~6,200 rpm*)离心 10 min,离心后收集 EPF 柱管底的液体,此液体即为纯化后的外泌体(注:EPF 柱不可重复使用);*为约 7 cm 有效离心半径的小离心机换算(≤2 mL 离心管)。
7、 外泌体的保存:纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于 -80℃ 低温冰箱中,以备后续实验使用。
操作视频
注意事项:
1、 新的 Exosome Extraction Column 柱子的上筛板和填料表面之间可能存在一定的空隙,该现象是运输过程中晃荡造成的,并不影响其性能,实验前将筛板向下推动至填料表面即可;
2、 Exosome Extraction Column 和 Exosome Purification Filter 均为一次性耗材,请勿重复利用,否则可能会造成堵柱而损失样品;
3、 Solution C 为 Tris 缓冲盐溶液;
4、 流穿液呈红色,是由于培养基中色素和外泌体同时被洗脱所致,不影响后续实验。若需去除色素,可使用 100KD 超滤柱置换缓冲液;
QA
Q1:收获的外泌体样品呈红色,是否影响后续使用?
A1:不影响!收获的外泌体样品呈红色,是由于培养基中色素或维生素同外泌体同时被洗脱所致,不影响后续实验。若需去除,可使用100 KD超滤柱置换缓冲液。
Q2:上样过程中样本无法流穿柱子或者流速非常慢?
A2:请停止上样!这是由于样本中大颗粒物质未去除干净造成的,所以上样前样本请务必使用0.45 μm或0.22 μm滤器过滤。
经典案例:
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【45434331批次】COA-UR52170 外泌体提取纯化试剂盒-柱纯法(细胞上清) V3.0.pdf 附件下载 (下载 1 次)
UR5217 外泌取提取纯化试剂盒-柱纯法(细胞上清) 产品说明书 V4.1 20240524.pdf 附件下载 (下载 3 次)
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